[標題]
利用減除式雜交法(Subtractive Hybridization)篩選茄子經淹水處理所誘導表現的基因
[摘要]
研究差異性表達基因的方法有很多種,其中差異性展現法(Differential Display、DD)以及減除式雜交法(Subtractive Hybridization、SH)最為容易且廣為被應用於各種實驗裡;差異性展現法(DD)為一應用差異表現片段長度的基因研究法,而減除式雜交法(SH)則應用mRNA和cDNA互補序列會形成hybrid的特性,篩選有差異的單股cDNA片段。
本實驗即在利用SH,分析篩檢經不同淹水時間,茄子(屏東長茄EG )有差異性表達的轉錄產物;將不同淹水時間(0,15,30,60min,3,6,12,24 and 48 hr)處理的茄子根部取下,抽 RNA,把實驗組(15,30,60min,3,6,12,24 and 48 hr)的mRNA反轉錄成cDNA,分別和對照組的mRNA(淹水0小時)做SH,將減除得到的單股cDNA經反轉錄成雙股cDNA,再clone到vector再transform到E.coli養菌,塗X-gal盤,抽取白點的plasmid DNA,經PCR放大後將其產物跑agarose gel,以確定正確size的plasmid DNA;最後和中研院合作,利用現有的茄子cDNA microarrary,和所clone到的差異性表達cDNA片段進行雜合,期望找出這些差異性表現出的cDNA功能。
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