[標題]
利用減除式雜交法(Subtractive Hybridization)篩選茄子經淹水處理所誘導表現的基因
[摘要]
研究差異性表達基因的方法有很多種,其中差異性展現法(Differential Display、DD)以及減除式雜交法(Subtractive Hybridization、SH)最為容易且廣為被應用於各種實驗裡;差異性展現法(DD)為一應用差異表現片段長度的基因研究法,而減除式雜交法(SH)則應用mRNA和cDNA互補序列會形成hybrid的特性,篩選有差異的單股cDNA片段。
本實驗即在利用SH,分析篩檢經不同淹水時間,茄子(屏東長茄EG )有差異性表達的轉錄產物;將不同淹水時間(0,15,30,60min,3,6,12,24 and 48 hr)處理的茄子根部取下,抽 RNA,把實驗組(15,30,60min,3,6,12,24 and 48 hr)的mRNA反轉錄成cDNA,分別和對照組的mRNA(淹水0小時)做SH,將減除得到的單股cDNA經反轉錄成雙股cDNA,再clone到vector再transform到E.coli養菌,塗X-gal盤,抽取白點的plasmid DNA,經PCR放大後將其產物跑agarose gel,以確定正確size的plasmid DNA;最後和中研院合作,利用現有的茄子cDNA microarrary,和所clone到的差異性表達cDNA片段進行雜合,期望找出這些差異性表現出的cDNA功能。
2004-05-06
終於找到了^^
一個很好玩的計數器Counter/Site Stats,
除了基本的計數功能外,在counter上按下去,
會另開視窗出現很清楚的圖表,統計分析以下的瀏覽量:
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[First-time Visitor] has never visited your website.
[Returning Visitor] has previously visited your website.
同一個免費帳號可以有三個webcounters,範例在右側google神像下方..
之前看別人在網頁上用過,覺得很好玩,
可是網址不小心被我搞丟了...
前陣子偶然之間發現一個blog也有在用,
就立刻連上去申請了一個;
因為飛天很好奇,
想知道除了那些常發言的朋友外,
還有多少不出聲的潛水者也在瀏覽這個blog^^
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耶~見血了~~
今天從開始就不對頭:
到學校後趕回實驗室去拿實驗衣,
發現今天要去聽安全講習><
帶實驗的時候先是打破了一個燒杯,
之後倒到回收桶時又將它打破了一次,
然後發現學校停水....
(&$%#$@...今天玩青蛙耶><)
拿針筒吸取脫鈣劑(福馬林+鹽酸+水)時,
不小心將針頭戳到左手食指,
(還好我還沒開始吸脫鈣劑也沒打青蛙)
當場見血!血流如注,
還滴到實驗衣上
(不知道是誰的實驗衣,
要帶回去洗完後再還回實驗室去),
地上也有,看起來很怵目驚心,
稍後處理青蛙時,手指還隱隱作痛><
(有時候真懷疑,
選擇文化這個需要巧手的研究所,
這個決定正不正確...)
BTW:
幫青蛙打針的技巧要感謝盈嘉的專業指導
~^^~
學校停水,
這讓我花了不少時間在處理傷口和善後工作上面,
因此課程時間掌控不佳;
一直到下一班實驗課學生進來時,
有些天兵才開始收實驗器材...
話說回來,
今年系上學弟妹考上中興的人數真多....
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